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什么是ELISA直接法?
更新時間:2017-01-20   點擊次數(shù):3136次

ELISA直接法試驗過程:
一、包被抗原
1) 用 PBS 或碳酸鹽緩沖液稀釋抗原至終濃度 20 μg/ml。用移液器汲取 50 μl 稀釋抗原到 PVC 酶標(biāo)板上,按要求往后進行系列稀釋。
2) 酶標(biāo)板上掩蓋封口膜,室溫孵育 2 小時,或許 4 °C 過夜。孵育時刻需求優(yōu)化。
3) 倒掉孵育溶液,用 PBS 洗板 2 次,每孔 200 μl。在水池上輕甩倒掉洗液,在紙巾上輕拍酶標(biāo)板除去殘留液體。
二、關(guān)閉
1) 用含 5% 脫脂奶粉或含 5% 血清的 PBS 緩沖液關(guān)閉酶標(biāo)板上剩下的蛋白位點,每孔 200 μl。或許用別的關(guān)閉劑如 Block ACE、BSA(牛血清蛋白)替代。
2) 封口膜掩蓋酶標(biāo)板室溫zui少孵育 2 小時,或許 4 °C 過夜。
3) PBS 洗板 2 次。
三、加抗體孵育
1) 參加抗體,每孔 100 μl,稀釋到濃度(參照廠家引薦),使用前用關(guān)閉液現(xiàn)配。
2) 封口膜掩蓋酶標(biāo)板室溫孵育 2 小時,孵育時刻需求進行優(yōu)化。一般 2 小時孵育即可取得滿足強的信號,但如果取得的信號較弱時,可4 °C 孵育過夜取得較強信號。
3) PBS 洗板 4 次
四、檢查
1) 用多通道吸液器參加底物,每孔 100 μl(或 50 μl)。
2) 顯示出滿足深的色彩后,加停止液(如有必要),每孔 100 μl。

 

 

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